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細菌內毒素檢查法(定量檢測)之光度測定法

發布時間: 2022-07-20  點擊次數: 1635次

細菌內毒素檢查法(定量檢測)之光度測定法試驗應在特定的儀器中進行,溫度一般為37℃±1℃。為保證濁度和顯色試驗的有效性,應預先進行標準曲線的可靠性試驗以及供試品溶液的干擾試驗。當試驗環境中發生了任何可能影響檢測結果的改變時,試驗的有效性應重新檢測。

 

1.標準曲線的制備

用標準內毒素配成溶液并制成至少3個濃度的稀釋液(稀釋度不得大于10)濃度不得低于所用鱟試劑的標示檢測限。每一稀釋步驟的混勻時間同凝膠法,每一濃度至少做3支平行管。同時要求做2支陰性對照。當陰性對照在設定的時間內不發生反應,將全部數據進行線性回歸分析。根據線性回歸分析,標準曲線的相關系數(r)的絕對值應該大于或等于0.980.試驗方有效。否則須重新試驗。

 

2.細菌內毒素檢查法(定量檢測)之光度測定法:

“光度法的干擾試驗"中的操作步驟進行檢測。

 

使用溶液C生成的標準曲線來計算溶液A的每一平行管的內毒素濃度。

 

選擇標準線中點或一個靠近中點的內毒素濃度。制備溶液ABCD。供試品和鱟試劑的加樣量、供試品和鱟試劑的比例以及保溫時間等,參照所用儀器和試劑的有關說明進行。每種溶液至少做2個平行管。

 

細菌內毒素檢查法-試驗須符合以下三個條件方為有效:

 

  1. 系列溶液C的結果要符合“光度技術預試驗"下“標準曲線的可靠性試驗"中的要求。

 

  1. 用溶液B中的內毒素濃度減去溶液A中的內毒素濃度后,計算出的內毒素的回收率要在50%-200%的范圍內。

 

  1. 溶液D(陰性對照)在規定的反應時間內未檢測出內毒素。

 

若供試品溶液所在平行管的平均內毒素濃度乘以稀釋倍數和濃度后,小于規定的內毒素限值,判供試品符合規定。若大于規定的內毒素限值,判供試品不符合規定。

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